分享B淋巴细胞功能生物标记和临床意义

B 淋巴细胞 (B 细胞) , 是机体体液免疫的主要细胞。这类细胞以表达和分泌免疫球蛋白为特征。从某种意义上讲, 机体的体液免疫应答过程就是 B 细胞针对特异抗原而活化、增殖和分化过程。计数 B 细胞及检测免疫球蛋白 ,了解机体体液免疫状况 , 对于探讨各种疾病的免疫发病机理及药物治疗效应均有重要的临床意义 ;检测 B 细胞发育不同阶段的表面标记 , 了解 B 细胞发育和分化阶段的特性与疾病的关系 , 可为临床提供诊治相关疾病的有用资料。 一、B细胞计数 B 细胞具有独特的分化抗原 (CD) ,其中外周血 CD19 代表总 B 细胞 , 用荧光标记单克隆抗体做流式细胞分析可计数外周血细胞的总 B 细胞。正常人外周血 CD19 阳性率为 614 %～2216 % , 此百分数没有明显性别差异, 但随年龄增长总淋巴细胞数减少而相应减少。急性、慢性 B 淋巴细胞白血病和 Burkitts 淋巴瘤患者骨髓和外周血中除 CD19+ 细胞增高外 , 幼稚 B 细胞分化抗原 CD10、CD22 明显增高。而 X - 连锁无丙种球蛋白血症(XLA) 和严重联合免疫缺陷病(SCID) 患者外周血 CD19+ 细胞则缺乏或明显减少。CD23 是成熟、活化 B细胞的分化标志 , 骨髓中不成熟的 B 细胞和已分泌免疫球蛋白的浆细胞均不表达CD23 ;哮喘等过敏性疾病患者外周血CD23+ 细胞增高与血清 IgE 增高呈正相关。 B细胞表面有多种受体 , 如膜表面免疫球蛋白 SmIg、小鼠红细胞受体、补体 C3 受体、有丝分裂原受体、Fc 受体、HLA - DR 抗原受体和 EB 病毒受体等 ,其中以 SmIg 为 B 细胞所特有 , 是鉴定B 细胞的可靠指标。SmIg 随细胞分化发育的程度而异 , 未成熟的幼稚 B 细胞多为 SmIgM+ 和 SmIgD+, 成熟细胞多为 SmIgG+、SmIgA+ 或 SmIgD+ 。 急性、慢性 B淋巴细胞白血病患者淋巴细胞亚群中80 %～90 %为 SmIg+ 细胞 ;某些先天性免疫缺陷症 , 如XLA 和重症联合免疫缺陷病(SCID) 患者外周血和淋巴组织中SmIg+ 细胞缺乏或减少。高 IgM 综合征患者外周血B细胞多为 SmIgM+ 、SmIgD+ 细胞 , 其它 SmIg 细胞缺乏或减少。选择性 IgA 缺陷者 SmIgA+ 细胞减少。 慢性 B 淋巴细胞白血病患者外周血淋巴细胞与小鼠红细胞形成 E 玫瑰花环率高达 60 %～85 % , 而健康人仅 5 %～10 % , 临床用作鉴别 B 淋巴细胞白血病。 二、血清 IgG、IgA 和 IgM 测定与意义 B 细胞受抗原或促丝裂原刺激后可行分裂增殖 , 分化成熟为抗体生成细胞 , 并分泌相应免疫球蛋白释放入血流和组织液中。血清 IgG、IgA 和 IgM 正常参考值随年龄和地区而有差异 , 因此在判断其水平时 , 应使用本地区的 , 最好是本单位各年龄组正常参考值。我国健康小儿血清免疫球蛋白含量可参考许积德主编的第 3 版《小儿内科学》。检测血清 IgG、IgA、IgM 含量 , 可了解机体的体液免疫功能状态 , 诊断免疫增生性疾病和免疫缺陷性疾病。目前国内多用单向免疫扩散法、免疫比浊法或激光免疫比浊法。单扩法简单、经济 , 但耗时长 ,结果不精确 ;比浊法精密、快速、可自动化 , 但需要相应仪器设备。 各种细菌、病毒感染的早期主要产生 IgM 抗体 , 随后产生 IgG 抗体 ;在获得性免疫缺陷综合征 (AIDS) 常有 B 细胞多克隆活化 , 血清 IgG、IgA、IgM 均增高。在自身免疫性疾病中 , 急性肾小球肾炎、特发性血小板减少性紫癜、甲状腺机能亢进时血清 IgG 增高 , 过敏性紫癜、IgA 肾病时血清 IgA 显著增高。系统性红斑狼疮血清 IgG、IgA 增高 , 幼年型类风湿关节炎血清 IgG、IgM、IgA 均增高。多发型骨髓瘤因产生的 Ig不同分为IgA、IgG 型。其它恶性肿瘤、原发性巨球蛋白血症、慢性淋巴细胞性白血病、重链病、肝脏疾病可有单克隆或多克隆性 Ig增高。抗体缺陷为主的原发性免疫缺陷病 , 如 XLA 各类 Ig 均降低 ;高IgM 综合征血清 IgM 增高或正常 , 其它Ig降低 ;普通变异型免疫缺陷病(CVID)各类 Ig 均降低 , 以 IgG 为主 ;选择性IgA 缺陷时 IgA1 或 IgA2 减少 ;婴儿暂时性低丙种球蛋白血症时血 IgG和IgA减少。继发性免疫缺陷病 , 如肾病综合征、失蛋白性肠病、烧伤等血清IgG、IgA 降低 ;恶性肿瘤、淋巴增生性疾患、应用免疫抑制剂、X 线照射、胶原病等均可使多种 Ig 降低。 三、血清IgD、IgE测定和意义 正常人血清 IgD 亦随年龄变动 , 正常参考值见赵武述等主编的《现代临床免疫学》。血清 IgD 升高主要见于 IgD 型骨髓瘤、慢性骨髓炎、皮肤感染和桥本甲状腺炎等疾病。 血清 IgE 含量较低 ,多采用酶免疫法和放射免疫方法检测。血清 IgE 的检测分总 IgE 和特异性 IgE 两种测法。由于总 IgE 正常值范围变化幅度较大 ,故临床使用价值目前尚难肯定 ,正常人血清 IgE 随年龄变动 ,正常参考值见赵武述等主编的《现代临床免疫学》。血清IgE 的检测 ,主要作为过敏性疾病的观察指标和治疗效果的判断 ,支气管哮喘、荨麻疹、过敏性鼻炎等过敏性疾病及寄生虫病、何杰金病病人的血清 IgE 浓度增高。 四、血清 IgG亚类测定和意义 人的 IgG可分为 IgG1、IgG2、IgG3和 IgG4 四个亚类 , 可用单克隆抗体EL ISA 法检测。正常儿童血清 IgG亚类水平无性别差异 , 随年龄变动 , 正常参考值见《上海免疫学杂志》[ 1990 ;10 (3) :160 ] 。 近年来发现 IgG亚类缺陷病 , 是常见的体液免疫缺陷病 , 在反复呼吸道感染的儿童中 , 约 24 %～27 %伴有一种或多种 IgG亚类缺陷。由于某一 IgG亚类缺乏时可有其它亚类代偿性增高 , 使血清总 IgG水平正常 , 甚至轻度增高 , 故检测总 IgG不能发现本病 , 唯一确诊的方法是检测血清IgG的亚类。由 于IgG1、IgG3 是针对蛋白质、病毒的主要抗体成分 , IgG2 是针对多糖抗原的主要抗体成分 , 因此 , IgG1、IgG3 缺陷时易发生病毒和产生类毒素的细菌感染 , 而IgG2 缺陷时易发生肺炎球菌等含荚膜多糖的细菌感染。反之 , 在川崎病、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病时血清IgG1、IgG3 增高。 五、抗体测试 血清 Ig 水平不一定代表抗体的亲和性 , 血清 Ig 正常不能排除功能性抗体反应缺陷 , 因此 , 抗体测定对筛查免疫缺陷病意义重大。 1、特异性抗体产生能力的体内试验 主要测定机体对抗原的应答能力 , 常用的蛋白质抗原有白喉类毒素、破伤风类毒素、乙肝疫苗 , 有条件者可用噬菌体φX174 抗原 ;多糖抗原如肺炎球菌、脑膜炎球菌和嗜血流感杆菌抗原。给受检者注射适量上述抗原 , 经一定诱导期 ,取血用适当方法测定血清相应抗体效价。蛋白质抗原主要激发 IgG1 和 IgG3抗体反应 , 多糖抗原主要激发 IgG2 抗体反应。2 岁以下婴幼儿因 IgG2 产生能力差 , 检测抗多糖抗体意义不大 , 此时应接种与蛋白载体结合的多糖抗原 ,以利于激发 IgG2 抗体。凡 B 细胞功能低下或有 IgG亚类缺陷的患者 , 接种上述抗原后 , 血清中测不出相应的抗体或仅测到低水平的抗体。 2、B 细胞产生抗体能力的体外试验 B 细胞在体外经抗原刺激后 , 可增殖分化成抗体生成细胞 , 继而分泌抗体。检测 B 细胞体外产生抗体的能力是免疫学中十分有用的一种方法 , 不仅可以了解 B 细胞功能 , 还可研究在抗体产生过程中 , B 细胞分化增殖所需的条件 , 以及 T 细胞和巨噬细胞等与 B 淋巴细胞相互作用的调节机制。通常用美州商陆(PWM) 刺激外周血单个核细胞无菌培养 6～7 天 , 用 EL ISA 方法测定释放到上清液中的 IgG。某些体液免疫缺陷病和联合免疫缺陷病患者 B 细胞体外产生抗体的能力缺乏。该试验目前主要用于研究免疫缺陷病和自身免疫性疾病的发病机理。 3、B 细胞增殖能力试验 金黄色葡萄球菌 Cowan I ( SAC) 对人 B 细胞具有促丝裂原作用 , 其诱导人B 细胞增殖是一个不依赖 T 细胞的过程 , 可用本法测定 B 细胞的应答反应。其操作原则是将 SAC 与淋巴细胞混合 ,体外培养 50 小时后 , 加3H - TdR , 再继续培养 22 小时 , 处理标本按3 H - TdR掺入法常规测 cpm。该方法结果准确 ,灵敏和客观。尤其是采用微量细胞培养板、细胞收集器和液闪测定仪 , 使此法变得容易。某些体液免疫缺陷病和联合免疫缺陷病患者 B 细胞增殖功能低下。该试验目前主要用于研究免疫缺陷病和自身免疫性疾病的发病机理。